糞便DNA 分離試劑盒產品說明書

主要用途

 糞便DNA 分離試劑是一種旨在直接從各種糞便（人體、動物等）中提取細胞或細菌DNA，有效地去除各種污染物（蛋白或核酶）和抑制劑（PCR 多聚酶抑制劑等）的經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。其應用于即時 PCR、RLPF 分析、測序、雜交、遺傳鑒定、突變分析、性別鑒定、司法鑒定等。產品即到即用，性能穩定，操作簡單，純度產量高，重復性好。

技術背景

糞便中含有許多污染成分，降解DNA和抑制PCR反應。通過冷凍處理、化學緩沖、孵育溫度、大劑量特級

酶、十六烷基*基溴化銨（cetyltrimethyl－ammonium bromide；CTAB）純化、異硫氰酸胍（GuSCN）處理、特別萃取等技術方法有效地去除各種干擾因子。

產品內容

 緩沖液（Reagent A） 毫升

 增強液（Reagent B） 毫升

 分離液（Reagent C） 毫升

 酶解液（Reagent D） 毫升

 萃取液（Reagent E） 毫升

 濃縮液（Reagent F） 毫升

 沉淀液（Reagent G） 毫升

 清理液（Reagent H） 毫升

 保存液（Reagent I） 毫升

產品說明書                   1 份

保存方式

保存 增強液（Reagent B）、 酶解液（Reagent D）和 萃取液（Reagent E）在

－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6 月

用戶自備

15 毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

2 毫升離心管：用于DNA 純化操作的容器

1.5 毫升離心管：用于保存DNA

臺式離心機（例如EPPENDORF5810）：用于沉淀雜質

微型臺式離心機（例如EPPENDORF5415）：用于沉淀核酸

渦旋震蕩儀：用于混勻反應物

恒溫水槽：用于孵育反應物

實驗步驟

實驗開始前，將增強液（Reagent B）、酶解液（Reagent D）和萃取液（Reagent

E）從－20℃冰箱里取出，放入冰槽里融化。然后進行下列操作：

一、 糞便細胞DNA 萃取

1． 秤取300 毫克的糞便樣品放進15 毫升錐形離心管

2． 放入－70℃冰箱里過夜

3． 加入xx 毫升 緩沖液（Reagent A）到15 毫升錐形離心管

4． 室溫下靜置15 分鐘

5． 強力渦旋震蕩，直至固態物質充分混勻（此步驟重要）

6． 放進臺式離心機離心30 分鐘，速度為3000g

7． （選擇步驟）小心移出上清液到15 毫升錐形離心管

8． （選擇步驟）放進臺式離心機離心30 分鐘，速度為3500g

9． 小心移出500 微升上清液到新的2 毫升離心管

10．加入xx 微升 分離液（Reagent C）（注意：使用前，先搖勻 分離液（Reagent C））

11．加入xx 微升 酶解液（Reagent D）（注意：使用前，先混勻 酶解液（Reagent D））

12．渦旋震蕩15 秒

13．放進60℃恒溫水槽孵育30 分鐘（注意：可以增加孵育時間至2 小時，增加DNA 產量）

14．放進微型臺式離心機離心20 秒，速度為400g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）

15．（選擇步驟）放進微型臺式離心機離心10 分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）（注意：強化去除有色雜質：白色、黃色、棕色等）

16．（選擇步驟）小心移出上清液到新的2 毫升離心管（注意：留下100 微升液體）

17．加入xx 毫升 萃取液（Reagent E）（注意：使用前，先搖勻 萃取液（Reagent E））

18．渦旋震蕩30 秒

19．放進微型臺式離心機離心15 分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

20．移出xx 微升上層液相溶液到新的1.5 毫升離心管（注意：不要觸碰相位交界面）

21．加入xx 微升 濃縮液（Reagent F）

22．加入xx 微升 沉淀液（Reagent G）

23．上下翻轉10 至15 次，混勻

24．靜置5 分鐘

25．放進微型臺式離心機離心15 分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

26．小心抽掉上清液

27．加入xx 毫升 清理液（Reagent H）

28．放進微型臺式離心機離心5 分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

29．小心抽掉上清液

30．空氣中晾干

31．加入xx 微升 保存液（Reagent I），溶解

32．移出適量DNA 溶液進行后續PCR 反應或保存在－20℃冰箱里

二、 糞便細菌DNA 萃取

1. 秤取300 毫克的糞便樣品放進15 毫升錐形離心管

2. 放入－70℃冰箱里過夜

3. 加入 xx 毫升  緩沖液（Reagent A）到 15 毫升錐形離心管

4. 室溫下靜置 15 分鐘

5. 強力渦旋震蕩，直至固態物質充分混勻（此步驟重要）

6. 煮沸 5 分鐘

7. 室溫下靜置 15 分鐘

8. （選擇步驟）加入 xx 微升  增強液（Reagent B）

9. （選擇步驟）渦旋震蕩 15 秒

10. （選擇步驟）放進 37℃恒溫水槽孵育 2 小時

11. 放進臺式離心機離心 30 分鐘，速度為 3000g

12. （選擇步驟）小心移出上清液到 15 毫升錐形離心管

13. （選擇步驟）放進臺式離心機離心 30 分鐘，速度為 3500g

14. 小心移出 500 微升上清液到新的 2 毫升離心管

15. 加入 xx 微升  分離液（Reagent C）（注意：使用前，先搖勻  分離液（Reagent C））

16. 加入 xx 微升  酶解液（Reagent D）（注意：使用前，先混勻  酶解液（Reagent D））

17. 渦旋震蕩 15 秒

18. 放進 60℃恒溫水槽孵育 30 分鐘（注意：可以增加孵育時間至 2 小時，增加 DNA 產量）

19. 放進微型臺式離心機離心 20 秒，速度為 400g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）

20. （選擇步驟）放進微型臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例 如 eppendorf 5415）（注意：強化去除有色雜質：白色、黃色、棕色等）

21. （選擇步驟）小心移出上清液到新的 2 毫升離心管（注意：留下 100 微升液體）

22. 加入 xx 毫升  萃取液（Reagent E）（注意：使用前，先搖勻  萃取液（Reagent E））

23. 渦旋震蕩 30 秒

24. 放進微型臺式離心機離心 15 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

25. 移出 900 微升上層液相溶液到新的 1.5 毫升離心管（注意：不要觸碰相位交界面）

26. 加入 xx 微升  濃縮液（Reagent F）

27. 加入 xx 微升  沉淀液（Reagent G）

28. 上下翻轉 10 至 15 次，混勻

29. 靜置 5 分鐘

30. 放進微型臺式離心機離心 15 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

31. 小心抽掉上清液

32. 加入 xx 毫升  清理液（Reagent H）

33. 放進微型臺式離心機離心 5 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

34. 小心抽掉上清液

35. 空氣中晾干

36. 加入 xx 微升  保存液（Reagent I）溶解

37. 移出適量 DNA 溶液進行后續 PCR 反應或保存在－20℃冰箱里

注意事項

1． 本產品為 10 次（4 至 10 克樣品）或 50 次（100 至 300 毫克樣品）操作

2． 操作時，須戴手套

3． 建議糞便樣品收集后，即刻放進－70℃冰箱里長期儲存，避免反復凍融

4． 收集糞便樣品時，避免不必要的污染

5． 糞便固態物質充分混勻后，可以放進－70℃冰箱里長期儲存，但建議只需凍融一次

6． 糞便樣品量為 100 至 300 毫克；如果用戶需要從大量糞便中提取，可以按比例相應增加操作量即可

7． 為了確保萃取效果，建議完成選擇步驟的操作

8． 通常 300 毫克樣品可以提取 20 微克左右 DNA 量；但不同樣品，存在很大差異（5 至 100 微克）

9．  分離液（Reagent C）和  酶解液（Reagent D）易形成晶狀體，使用前可 37℃溫育融化

10．如果糞便中含有特殊干擾因子，建議使用  糞便 DNA 高質純化試劑盒-GMS20011.4

11．本公司提供系列糞便核酸純化試劑產品