食物總抗氧化能力（TAC）比色法（DPPH）定量檢測試劑盒產品說明書

主要用途

     食物總抗氧化能力（TAC）比色法（DPPH）定量檢測試劑是一種旨在通過有機氮自由基染料DPPH的參與，在抗氧化劑的存在下，通過分光光度儀，觀察其峰值下降的變化，來定量檢測對應于標準水溶性生育酚Trolox的總抗氧化能力，即消除自由基等值濃度經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。適用于各種新鮮組織（動物、人體、昆蟲等）的總抗氧化能力檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡易，性能穩定。

產品內容

清理液（Reagent A）     毫升

緩沖液（Reagent B）     毫升

染色液A（Reagent C1）     瓶

染色液B（Reagent C2）     毫升

標準液（Reagent D）     微升

產品說明書     1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

50毫升燒杯：用于樣品操作的容器

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于標準樣品配制的容器

4℃臺式離心機：用于樣品操作

96孔板：用于比色的容器

分光光度儀或酶標儀：用于比色分析

實驗步驟

• 樣品準備

1、固態食品處理

• 秤取1克固態食品或粉末到50毫升燒杯，杯口封口膜密封
• 加入xx毫升清理液（Reagent A）
• 攪拌30分鐘，充分混勻
• 繼續加入清理液（Reagent A）到終容量為10毫升
• 過濾紙過濾，去除不溶性固體顆粒
• 封口膜封口備用

2、液態食品處理

• 移取5毫升待測液態食品到15毫升錐形離心管
• 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為1500g
• 移取上清液到新的15毫升錐形離心管
• （選擇步驟）可以加入適量的清理液（Reagent A） 
• （選擇步驟）過濾紙過濾（如果離心處理，樣品仍然不清澈）
• 置于冰槽里備用或放進-20冰箱里保存

二、標準液準備

• 準備好5個1.5毫升離心管，標記為1至5號管
• 移取xx微升標準液（Reagent D）到1號管
• 小心移取xx微升緩沖液（Reagent B）和xx微升標準液（Reagent D）到2號管，混勻
• 小心移取xx微升緩沖液（Reagent B）和xx微升標準液（Reagent D）到3號管，混勻
• 小心移取xx微升緩沖液（Reagent B）和xx微升標準液（Reagent D）到4號管，混勻
• 小心移取xx微升緩沖液（Reagent B）到5號管
• 將1至5號管放進冰槽里備用，避免光照；標準管濃度見下表

三樣品測讀

實驗開始前，將－20冰箱里的試劑置于室溫下融化，實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑置于室溫下融化，移取xx毫升染色液B（Reagent C2）到xx瓶染色液A（Reagent C1）里，混勻，置于暗室里，標記為染色工作液，避免光照。然后進行下列操作。

• 準備1個96孔板，做好標記：空白對照孔、標準對照孔、樣品孔
• 分別移取xx微升緩沖液（Reagent B）到96孔板里的每個孔里
• 分別加入xx微升染色工作液 
• 加入xx微升緩沖液（Reagent B）到空白對照孔
• 加入xx微升上述配制的標準液（Reagent D）到相應標準對照孔里
• 加入20微升裂解樣品（100微克食品總量）到樣品孔里
• 輕輕搖動96孔板，使其混勻
• 室溫下孵育15分鐘
• 即刻放進酶標儀里測讀：515nm波長
• 分析結果：
  • 構建標準曲線：縱座標（Y軸）為吸光單位（OD730nm）；橫座標（X軸）為標準Trolox濃度（微摩爾/升）
  • 空白對照孔為大吸光單位（OD515nm）讀數
  • 標準對照孔和樣品孔為實際吸光單位（OD515nm）讀數
  • 根據標準曲線獲得樣品對應Trolox濃度（微摩爾/升）
  • 計算樣品實際總抗氧化能力
• 根據下列公式計算測定體系中樣品量的總抗氧化能力（實際抑制百分率）
• IC50：50％抑制率所需的樣品單位：TROLOX等值或樣品重量（毫克/毫升）或樣品容量（微升）

注意事項

• 本產品為50次操作
• 本產品測試范圍為25至800微摩爾Trolox等值
• 操作時，須戴手套
• 樣品制備的所有操作均須在4℃狀態下進行
• 測試前，樣品須新鮮收集
• 樣品須清澈
• 空白對照孔的吸光讀數應為1.0左右為佳
• 樣品讀數越低，抗氧化能力越高
• 可以使用比色皿檢測
• 如果樣品抗氧化劑濃度過高或過低， 建議稀釋或增加樣品容量或濃度
• 如果測試樣品很多，建議使用排槍移液
• 本公司提供系列抗氧化分析試劑產品