操作指南

BD采用技術(shù)，從富含胞外基質(zhì)蛋白的EHS小鼠腫瘤中分離出BD Matrigel 基底膜基質(zhì)，其主要成分由層粘連蛋白，Ⅳ型膠原，巢蛋白，硫酸肝素糖蛋白等組成，還包含生長因子和基質(zhì)金屬蛋白酶等。BD Matrigel基底膜基質(zhì)在室溫條件下，聚合形成具有生物學活性的三維基質(zhì)，模擬體內(nèi)細胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能，有利于體外細胞的培養(yǎng)和分化，以及對細胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達的研究。

BD Matrigel 基底膜基質(zhì)形成的三維培養(yǎng)基質(zhì)，可促進上皮細胞、肝細胞、Sertoli細胞、黑色素瘤細胞、血管內(nèi)皮細胞、甲狀腺細胞及毛囊細胞等的貼壁與分化。同時，Matrigel還能影響乳腺上皮細胞的蛋白表達，支持外周神經(jīng)的新生和牛輸卵管上皮細胞的分化。高濃度的Matrigel適用于研究體內(nèi)血管生成和腫瘤細胞遷移及腫瘤模型的建立等。

產(chǎn)品特性

Matrigel基質(zhì)會有色差變化（淡黃色到深紅色），是由于酚紅和碳酸氫鹽與CO2作用引起的，但是與5％CO2平衡后色差即會減少。凍融后，輕輕搖晃試劑瓶使Matrigel分散均勻。所有操作均需在無菌環(huán)境下進行，試劑瓶瓶蓋可用70％乙醇擦拭，并自然干燥。應使用預冷的移液器以保證Matrigel呈勻漿狀。

細胞可在0.5mm厚度的Matrigel基質(zhì)層表面生長，也可在1mm厚度的Matrigel三維基質(zhì)內(nèi)生長。過度稀釋的Matrigel會形成非膠質(zhì)的蛋白層，可以用于細胞貼壁，但不能用于細胞的分化研究。

注意：可將凍融后的Matrigel分裝在多個小管，所有分裝均需用預冷的凍存管，迅速冷凍并保存，避免多次凍融。

Matrigel在22-35℃溫度環(huán)境下快速成膠，因此溶解時在4℃冰上過夜凍融（4度時會隨著溫度的上升部分成膠）。所有用品在使用前需置于冰浴，必須使用預冷的移液管、吸頭及小管操作Matrigel。成膠后的Matrigel可以在4℃24－48小時后重新呈液態(tài)。

推薦包被與成膠方法

注意：為了保證Matrigel基質(zhì)膜的成膠性能與穩(wěn)定性，稀釋濃度不應低于1：3，可用無血清培養(yǎng)基稀釋，Matrigel成膠后立即使用。

薄膠成膠方法：

     1.凍融后，用預冷的移液槍頭混勻Matrigel基質(zhì)成勻漿狀。

     2.將需要使用的培養(yǎng)板置于冰上，加入濃度為50μL/cm2生長面積的Matrigel基質(zhì)。

     3.在37℃放置30分鐘，即可使用。

厚膠成膠方法：

     1.凍融后，用預冷的移液槍頭混勻Matrigel基質(zhì)成勻漿狀。

     2.將需要使用的培養(yǎng)板置于冰浴，將培養(yǎng)的細胞與Matrigel基質(zhì)混合，用移液槍頭使其懸浮于基質(zhì)中。加入濃度為150－200μL/cm2生長面積的Matrigel基質(zhì)。

     3.在37℃放置30分鐘，可成膠。可以加入細胞培養(yǎng)的基質(zhì)，也可使細胞直接生長在膠表面。

薄層包被方法：

    1.凍融后，用預冷的移液槍頭混勻Matrigel基質(zhì)成勻漿狀。

    2.根據(jù)使用需要，采用無血清培養(yǎng)基稀釋Matrigel基質(zhì)。根據(jù)實驗需要確定最佳包被濃度。

    3.將稀釋的Matrigel基質(zhì)包被于所需的培養(yǎng)器皿中，包被量至少覆蓋整個器皿的生長表面。室溫下孵育1小時。

    4.去除未結(jié)合的Matrigel，用無血清培養(yǎng)基輕輕地沖洗。