MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒說明書

產品簡介：

MTT 比色法是一種檢測細胞存活和生長的方法。MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。MTT 檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為水不溶性的藍紫色 Formazan 并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。在特定溶劑存在的情況下，可以被*溶解。然后通過酶標儀可以測定 570nm 波長附近的吸光度。細胞增殖越多越快， 則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。

MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒采用了 自主研發Formazan solvent，使檢測本底低，靈敏度高，線性范圍寬。

產品組成：

1、 細胞培養液

2、 胰蛋白酶消化液

3、 低速離心機

4、 96 孔培養板

5、 細胞計數板或計數器

6、 細胞培養箱

7、 搖床

8、 顯微鏡

9、 酶聯免疫檢測儀

操作步驟(僅供參考)：

1、細胞用含血清的培養液培養至對數生長期，常規胰蛋白酶消化液消化細胞(懸浮細胞無需消化)。

2、低速離心，收集細胞沉淀。

3、用培養液重懸細胞沉淀，制備成單細胞懸液，并計數。

4、細胞接種于 96 孔培養板，一般接種密度為 3000～10000 個細胞/孔。通常細胞增殖實驗每孔加 3000 個細胞，細胞毒性實驗每孔加入 6000 個細胞。具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大

小，細胞增殖速度的快慢等決定。

5、37℃ 5%CO2 繼續培養或按照實驗具體需要進行培養，一般培養 6～24h。

6、按照實驗具體要求，給予 0～20μl 干預藥物處理，37℃ 5%CO2 繼續培養至合適時間。

7、棄培養液，每孔加入 10μl MTT solution 和 100μl 新鮮培養液，在細胞培養箱內繼續孵育 4h。

8、棄培養液，每孔加入 110μl Formazan solvent，置搖床上低速振蕩 10 min，使結晶物充分溶解。如果紫色結晶較小或較少，溶解的時間會短一些。如果紫色結晶較大或較多， 溶解的時間會長一些。

9、在酶聯免疫檢測儀 570nm 測定各孔吸光度。

注意事項：

1、 MTT solution 盡量減少反復凍融的次數，當顏色變為灰綠色時，請勿使用。

2、 由于使用 96 孔板進行檢測，如果細胞培養時間較長，應注意蒸發問題。

3、 MTT solution 在低溫情況下會凝固，置于室溫或 20～25℃水浴至全部融解后使用。

4、 Formazan solvent 可以-20℃儲存，當產生沉淀或凝固時可以 37℃水浴孵育以促進溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。

5、 觀察formazan 是否*溶解，亦可以借助光學顯微鏡觀察。

6、 培養細胞時盡量細菌避免污染。

7、 應注意設立 OD 調零孔和對照。

8、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期： 12 個月有效。