石蠟切片神經組織金屬鋅改良蒂姆（Neo-TIMM）染色試劑盒產品說明書

主要用途

石蠟切片神經組織金屬鋅改良蒂姆（Neo-TIMM）染色試劑是一種旨在使用新型蒂姆硫化法銀染技術，分析存檔中的石蠟組織切片里神經系統中含鋅神經細胞結構分布的而經典的技術方法。該技術經過精心改良蒂姆（Timm）方法、成功實驗證明的。主要適用于石蠟腦組織（海馬齒狀回門區hilus of dentate gyrus、安蒙氏角 cornu ammonis、大腦皮層、丘腦、杏仁核amygdala nuclei或外周神經組織切片，例如海馬（hippocampus）中苔蘚纖維區（mossy fiber region）和齒狀分子層（dentate molecular layer）等含鋅神經細胞體，例如錐體細胞（pyramidal cells）、齒狀顆粒細胞（dentate granule cells）等檢測。廣泛用于腦理生理，尤其是退行性變包括癲癇、自閉癥、精神分裂癥、腦損傷、腦缺血等疾病的研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。

產品內容

硫化液（Reagent A）  毫升

固著液（Reagent B）    毫升

脫蠟液（Reagent C）         毫升

補水液A（Reagent D）  毫升

補水液B（Reagent E）  毫升

補水液C（Reagent F）  毫升

清理液（Reagent G）  毫升

染色液A1（Reagent H1）       毫升

染色液A2（Reagent H2）       瓶

染色液A3（Reagent H3）       毫升

染色液B（Reagent I）  微升

產品說明書  1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保證3月

用戶自備

PBS緩沖液：用于灌注

無離子水：用于組織清洗

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

無菌鑷子：用于轉移動物腦組織

小型玻璃染色缸：用于組織或切片處理的容器

切片機：用于組織切片

明膠化載玻片和蓋玻片：用于切片后鋪片

中性樹脂：用于切片封片

光學顯微鏡：用于切片染色后觀察分析

實驗步驟

一、 樣本固著處理

1． 常規麻醉動物和手術（建議：使用用戶自備的4℃預冷的PBS由心臟處灌注約5至10分鐘，去除血液直至澄清，肝臟顯示灰白）

2． 使用適量的（xx毫升）4℃預冷的硫化液（Reagent A）灌注處理（建議：至少10分鐘，肝臟顯示發黑）

3． 使用適量的（xx毫升）4℃預冷的固著液（Reagent B）灌注處理

4． 即刻小心取出腦組織（組織顯示藍灰色調）

5． 小心放進xx毫升固著液（Reagent B）里

6． 置于4℃冰箱里浸泡孵育60分鐘

7． 轉移到xx毫升硫化液（Reagent A）里

8． 置于4℃冰箱里浸泡孵育30分鐘

9． 即刻用無菌鑷子夾起組織塊 

10． 放進用戶自備的無離子水清洗2分鐘

11． 用綿紙吸干組織快

12． 即刻進行常規4℃冰箱里30%蔗糖脫水過夜和石蠟處理后包埋

13． 取出組織塊，進行緩慢石蠟切片為20至100微米厚，并鋪片在明膠化載玻片上

二、 脫蠟處理

 1． 取出10片待測的20至100微米厚的石蠟包埋的組織切片 

2． 按下表依次放進小染色缸里孵育

小心移去切片上的清理液（Reagent G）

注意事項

1． 本產品為10次操作，其中20次染色操作

2． 操作時，須戴手套

3． 鋪片須使用明膠化載玻片，否則染色會掉片：第一用毛筆涂刷；第二保持濕潤3小時；第三用PARAFIN包裹后壓片

4． 切片建議30至50微米，過厚和過薄不利于檢測神經細胞

5． 注意操作安全，尤其使用固著液（Reagent B） 

6． 建議使用玻璃染色缸

7． 每次更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干

8． 試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面

9． 整個操作，在避光狀態下進行

10． 染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察 

11． 樣品染色后保存，避免光照

12． 鋅分布參考圖像如下：ao（olfactory bulb）：嗅球；cp（caudate putamen）：尾狀殼核；am（amygdala）：杏仁體；h（hilus of dentate gyrus）：齒狀回門區；s（subiculum of dentate gyrus in mossy fibers）：苔蘚纖維齒狀回門下腳；IV（IV layer of neocortex）：新皮質IV層 

13． 本公司提供系列神經系統成分染色試劑產品

質量標準

1． 本產品經鑒定性能穩定

2． 本產品經鑒定顯色清晰