組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP）活性測定試劑盒說明書

更新時間：2022-12-12

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規格：50管/24樣

注意：正式測定之前選擇 2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

AKP/ALP 是一種含鋅的糖蛋白酶，在堿性環境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP 廣泛分布于人體各臟器中，以肝臟為主。

測定原理：

在堿性環境中，AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉生成游離酚；酚與 4-氨基安替比林和鐵氰化反應紅色亞醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通過測定 510 nm 吸光度增加速率，來計算AKP 活性。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1 瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體×1 瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體×1 瓶，4℃避光保存，未變成藍綠色之前均可使用。

標準品：液體×1 支（EP 管中），2 μ mol/mL 酚標準液，4℃保存。

粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入 1mL 試劑一）進行冰浴勻漿，4℃、8000g 離心 10min，取上清液待測。

2. 血液可直接測定，或者適當稀釋后測定。

測定步驟：

1. 分光光度計預熱30min，調節波長到510nm，蒸餾水調零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30min。

3. 空白管：取EP管，加入20μL蒸餾水，200μL試劑二，200μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四600μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。

4. 標準管：取EP管，加入20μL標準品，200μL試劑二，200μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四600μL，混勻后于510 nm 測定吸光度，記為A標準管。

5. 對照管：取EP管，加入200μL試劑二，200μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四600μL，混勻；最后加入20μL上清液，混勻后于510 nm測定吸光度，記為A對照管。

6. 測定管：取EP管，加入20μL上清液，200μL試劑二，200μL試劑三，混勻后置于 37℃水浴中保溫15min；加入試劑四600μL，混勻后于510 nm 測定吸光度，記為A測定管。

注意：空白管和標準管只需測定一次。