蘇木素伊紅(HE)染色液套裝(含分化液)說明書

產品簡介：

蘇木素伊紅(HE)染色液套裝(含分化液)中蘇木素染色液采用 自主研發的配方，由進口的高純度蘇木精、氧化劑等組成，不含甲醇等有害物質，對細胞核染色效果好，其特點是不易產生沉淀和金屬膜；應用范圍廣，可以用于人、動物、畜牧、 水產等領域，可以用于組織石蠟切片、冰凍切片和組織細胞的染色等。蘇木素染色液和伊紅染色液均可以重復使用。該產品僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

染色原理：
1、細胞核染色原理：蘇木素為堿性天然染料，可使細胞核著色，細胞核內染色質的成分主 要是 DNA，在 DNA 雙螺旋結構中兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使 DNA 雙螺旋的外側帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇 木素在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。
2、細胞漿染色原理：伊紅是一種化學合成的酸性染料，在一定條件下可使細胞漿著色，細 胞漿的主要成分是蛋白質，為兩性化合物，細胞漿的染色與染液的 pH 值密切相關，當染色液 pH 值在胞漿蛋白質等電點(4.7～5.0)以下時，胞漿蛋白質以堿式電離，則細胞漿帶正電荷，就可被帶負電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負電荷的陰離子，與胞漿蛋白質 帶正電荷的陽離子結合，使細胞漿著色，呈現紅色。
3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液將組織過多結合的染色劑脫去，這個過程稱為分 化作用，所用的溶液稱為分化液。在 HE 染色中常用 0.5－1%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木素的醌型結構，使組織與色素分離而退色。大多數組織經蘇木素染色后，必須用鹽 酸乙醇分化，使細胞核過多結合的蘇木素染料和細胞漿吸附的蘇木素染料脫去，再進行伊紅 染色，才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。
4、返藍作用：分化之后，蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態，呈紅色；在堿性條件下處于藍色離子狀態，呈藍色。組織切片經酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色，立即用水除

去組織切片上的酸而中止分化，再用弱堿性水使蘇木素染上的細胞核呈現藍色，這個過程稱為返藍作用或藍化作用，另外用自來水(尤其是溫水)浸洗也可使細胞核返藍，但所需時間較長。

自備材料：

1、二甲苯或浸蠟脫蠟透明液、系列乙醇、返藍液、自來水或蒸餾水

2、乙醇混合固定液、4%多聚甲醛、中性樹膠或環保封片膠

操作步驟(僅供參考)：
(一)石蠟切片染色

1、切片脫蠟至水
①二甲苯或浸蠟脫蠟透明液(DZ2011)作用 2 次，每次 5～10min。
②(可選)無水乙醇作用 2 次，每次 3～5min。
③95%乙醇                                    3～5min
④90%乙醇                                    3～5min
⑤80%乙醇                                    3～5min
⑥自來水或蒸餾水(亦可用 30~40℃溫水)沖洗     1～3min
2、染色
①蘇木素染色液染色                           3～8min
②自來水或蒸餾水沖洗                         5～10s
③酸性乙醇分化                               2～5s
④自來水沖洗                                 20～30s
⑤返藍液或溫水返藍                           20～40s
⑥自來水沖洗                                 30～60s
⑦伊紅染色液(水溶)染色                       20～60s
⑧自來水沖洗                                 30～60s

3、脫水、透明、封固

①80%乙醇                         10～20s

②90%乙醇                         10～20s

③95%乙醇作用 2 次，每次 1～2min。

④無水乙醇作用 2 次，每次 2～3min。

⑤二甲苯或浸蠟脫蠟透明液(DZ2011)透明 3 次，每次 2～3min。

⑥中性樹膠封片。

(二)冰凍切片染色

1、-乙醇混合固定液      5～10s

2、自來水沖洗               2～5s

3、蘇木素染色液滴染 1～5min(可加熱至 50℃)。

4、自來水沖洗               2～5s

5、酸性乙醇分化             2～5s

6、自來水沖洗               2～5s

7、返藍液或溫水返藍         2～5s

8、自來水沖洗               5～10s

9、伊紅染色液(水溶)染色     2～20s

10、自來水沖洗              5～10s

11、80%乙醇                 1～2s

12、95%乙醇                 1～2s

13、無水乙醇                2～5s

14、苯酚二甲苯(1:3)         2～5s

15、二甲苯或浸蠟脫蠟透明液(DZ2011)透明 3 次，每次 2～5s。

16、中性樹膠封片。

染色結果：

細胞核呈藍色；細胞質、肌纖維、膠原纖維、甲狀腺膠質等呈深淺不一的紅色；角蛋白、紅細胞等呈明亮的橙紅色。

注意事項：

1、切片脫蠟應盡量干凈；溫度低時，可在恒溫箱 60~70℃處理。

2、系列乙醇應經常更換新液。

3、酸性乙醇分化時間應根據切片厚薄、組織類別以及新舊而定，另外分化后自來水沖洗時間應該足夠，以便清洗酸。

4、-乙醇混合固定液是由和95%乙醇等量混合而得，再加入適量乙酸，密閉保存。

5、冷凍切片染色時間盡量要短。

6、返藍液常使用0.2～1%氨水或 Scott促藍液或0.1～1%碳酸溶液代替。

7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：12 個月有效。常溫運輸和保存。