血漿中水楊酸的HPLC測定法

血漿中水楊酸的HPLC測定法

一、目的要求

1、掌握血液樣品前處理方法

2、掌握回收率測定方法和計算方法、

二、主要儀器和藥品。

 液相色譜儀,ODS分析柱，水楊酸標準品，空白血漿，標準血樣。

三、實驗方法

水楊酸（Salicylic Acid)

色譜條件與系統適用性試驗：色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（150mm x 4.6mm,5um)流動相：甲醇-磷酸二氫鉀（10mmol/L，ph3.0）（5:5）：流速1ml/min：檢測波長230nm：進樣體積20uL.理論板數以水楊酸峰計不低于2000.

血漿中水楊酸回收率測定：取水楊酸標準品適量，加甲醇溶解并稀釋成0.5mg/mL的對照品溶液，取適量用流動相稀釋成20ug/ml的標準品的稀釋液。另取空白血漿0.4ml，加入25ul水楊酸對照品溶液，漩渦混勻，加入0.2ml6%高氯酸沉淀蛋白，10000r/min離心10min，取上清液作為樣品測定液。同法制備血漿空白液，取對照品稀溶液，樣品測定液和需將空白頁各20ul、進行，記錄色譜圖。

回收率計算：根據對照品稀溶液濃度，峰面積和樣品測定液峰面積，水楊酸加入量，計算回收率。對照品稀溶液濃度C對=20ug/ml，樣品測定液中加入的水楊酸濃度Cm=（0.023 x 500）/（0.4+0.2+0.025）=20ug/ml，所以血漿中水楊酸回收=A樣/A對 x 100%

四、注意事項

1、標準品溶液與樣品液必須分別重復進行三次，取平均峰面積進行計算。

2、外標法測定含量，樣品處理中應嚴格定量操作。

3、為獲得高的精密度，驚醒量必須大于定量環容積的2-3倍

標準品