雜種細胞的選擇方法

雜種細胞的選擇方法

    經融合處理后會形成各種各樣的融合產物，它們在培養條件下有著不同命運。未熔合的原生質體和同源融合的原生質體較快地適應培養條件而生長發育，而異源融合體，特別是遠源不親和的雜種細胞在不經過選擇的情況下，常常因它們發育緩慢而受到有時生長的親本原質體融合細胞的抑制，不易發育成雜種。因此人們設計了一些選擇體系，有限選擇雜交細胞，或只允許雜種細胞生長，以淘汰親本細胞。

   zui簡單的選擇方法是利用雙親細胞形態和色澤上的差異來識別雜種細胞，但多數是依據下述細胞生理以創傷的特性來選擇。

1. 互補生長。親本原生質體生長要求外源激素，有時雜種細胞由于雙親的互補作用，產生內院激素，從而使得雜種細胞能再無激素的培養基上生長。
2. 營養缺陷型互補。如果一個親本是需要鹽酸的缺陷，另一個是葉綠體缺陷型病要求葡萄糖的突變體，這兩者融合，可在無煙酸的培養基上選擇雜種。
3. 白話體和野生型互補。如果某一些葉綠體缺失突變體能在限定的培養基上生長分化，而另一正常的親本在同樣培養基上不能發育成打的細胞團，融合后在限定培養基上選擇綠色的愈傷組織或幼苗
4. 抗性互補選擇。對抗性突變體或抗藥性有差異的材料可采用這種方法，如下圖

（5）機械分離方法。以上所講的各種選擇系統，都要求有各種突變體，然而在植物中，目前還很難做到象在微生物中那樣有許多突變體可供利用。因此機械分離方法有很大意義。

（6）用離心方法可以把異核體與親本原生質體分開，從而獲得融合體。采用顯微操作技術，也能把單個異核體分離出來進行培養。這兩種方法仍然是依據雙親原生質體和融合體的區別來挑選異核體的，在應用上仍有限制?，F在科學家發明了普遍使用的犯法，即采用無毒性的英冠標記雙親原聲質體，如果是融合細胞，就必定會具有與雙親不同的熒光標記。融合反應后，利用一種電子熒光激活選擇器自動分類和選擇融合細胞，這是一種很有前途的選擇雜種細胞的方法，預計極愛那個會在原聲質體融合融合選擇體細胞雜種中得到實際應用。